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ELISA反應需要一定時間的溫育快來了解

2025-06-26 [164]

ELISA屬固相,抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會,只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴散

才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應總是需要一定時間的溫育。

溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結合的合適溫度。

為加速反應,可提高反應的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度。在放射免疫測定中多使反應在冰箱中,以形成多的沉淀。但因所需時間太長,在ELISA中一般不予采用。

ELISA檢測試劑盒中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。

加標本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法 ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。

也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保 證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。在ELISA檢測試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后??乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當。

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